
當(dāng)代,對于瘧疾的診斷主要使用核苷酸擴(kuò)增法,然而,核苷酸擴(kuò)增法對于實(shí)驗(yàn)儀器的要求很高,需要的儀器復(fù)雜而昂貴,除了少數(shù)實(shí)力雄厚的實(shí)驗(yàn)室外,普通的實(shí)驗(yàn)室很難具備這樣的水平。鑒于這一問題,科學(xué)家們近期研發(fā)出一種新型環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法(LAMP),無需昂貴儀器就能對瘧疾進(jìn)行分子診斷,為分子技術(shù)提供了一套新平臺(tái)。
孟加拉國達(dá)卡市國際腹瀉病研究中心的科學(xué)家們與北美的同行們合作收集血樣,包括106份顯微鏡檢陽性的惡性瘧原蟲感染樣本和105份顯微鏡檢陰性樣本。被取樣者均有發(fā)熱等疑似瘧疾的癥狀。這些樣本會(huì)由經(jīng)驗(yàn)豐富的顯微鏡學(xué)家對厚涂片和薄涂片進(jìn)行常規(guī)顯微鏡檢。
美國紐約的生命技術(shù)公司(Grand Island)的英杰SYBR Green I超級混合物UDG提取DNA并執(zhí)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)。新設(shè)計(jì)的一組引物靶向18S核糖體核糖核酸(rRNA)基因,可檢測全血樣本中的惡性瘧原蟲。日本東京榮研化學(xué)株式會(huì)社的LAMP采用了這組新引物,這項(xiàng)研究通過比較以前描述的LAMP引物組評估了榮研化學(xué)株式會(huì)社的LAMP。用顯微鏡檢測和實(shí)時(shí)PCR作為檢測惡性瘧原蟲的參照方法。在LAMP反應(yīng)中預(yù)先加入羥基萘酚藍(lán)(HNB)引起明顯的變色,因而改進(jìn)了目測檢測系統(tǒng)。
實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新型LAMP測定相較顯微鏡檢的靈敏度為99.1%,相較實(shí)時(shí)PCR的靈敏度為98.1%,相對于顯微鏡檢和實(shí)時(shí)PCR的特異性分別為99%和100%。改進(jìn)的LAMP方法能在35分鐘內(nèi)檢測至少5只瘧原蟲/微升感染血,而這項(xiàng)研究所測試的另一種LAMP方法擴(kuò)增60分鐘后最少能檢測100只瘧原蟲/微升人血。
這項(xiàng)研究的發(fā)明者說,新的LAMP法診斷惡性瘧疾的靈敏度和特異性都很高。這一方法能作為PCR的替代性分子診斷工具,也許還能成為診斷瘧疾的標(biāo)準(zhǔn)方法,得到更廣泛的應(yīng)用。再者,這一方法非常有望成為保健檢查和流行病檢查中瘧疾的臨床診斷和治療監(jiān)控的實(shí)用型工具。
該研究成果最先于2014年3月5日發(fā)表在《Acta Tropica》雜志上。
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