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在兒科領(lǐng)域，感染性疾病的病理機制復雜多變，同一疾病可能由多種不同病原體引發(fā)。例如，兒童肺炎作為一類常見的呼吸系統(tǒng)感染性疾病，其致病因素多樣，特別是在學齡前兒童中，常見的病原體包括但不限于人鼻病毒、腺病毒及肺炎支原體等。

值得注意的是，兒童肺炎的病原譜具有動態(tài)變化的特點，受季節(jié)、地域和患兒年齡等因素影響，這不僅增加了臨床診斷的難度，也對快速精準制定治療方案構(gòu)成了挑戰(zhàn)。

圖源：Wen S, Lv F, Chen X, et al. Journal of Medical Microbiology, 2019, 68(8): 1211-1218.

目前，用于病原體鑒定的檢測方法包括分離培養(yǎng)、抗原/抗體檢測及核酸檢測等。盡管分離培養(yǎng)是“金標準”，但耗時長、靈敏度低；抗原/抗體檢測便捷，但靈敏度和特異性不足，且有窗口期限制。相比之下，核酸檢測因其高靈敏度和高特異性而在近年廣泛應(yīng)用于臨床。

核酸檢測技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測和測序技術(shù)兩大類。PCR檢測可進一步區(qū)分為單重PCR和多重PCR檢測。

多重PCR檢測在病原微生物感染中檢測精準、覆蓋廣泛，可以針對各病原體和內(nèi)參的基因序列設(shè)計不同的特異性引物，并對整個引物擴增體系進行優(yōu)化，確保每一組引物只能特異性擴增一種病原體或內(nèi)參。在反轉(zhuǎn)錄階段中，由特異性反向引物與相應(yīng)模板RNA結(jié)合進行反轉(zhuǎn)錄，得到反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（cDNA）。在PCR擴增反應(yīng)階段中，特異性的正向引物和反向引物以DNA或cDNA為模板進行多模板擴增進而產(chǎn)生大量的PCR產(chǎn)物，不同靶點的PCR產(chǎn)物長度不同。PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)過毛細電泳分離，將不同片段大小的PCR產(chǎn)物進行分離，通過對不同長度靶向DNA片段的識別從而判斷病原體類型。

圖：多重熒光PCR毛細電泳片段分析技術(shù)原理^[1]

多重熒光PCR毛細電泳片段分析技術(shù)具有靈敏度和特異性高、通量高、重復性好等優(yōu)勢，已被應(yīng)用于多個研究領(lǐng)域，該技術(shù)在病原學檢測中，能放大檢測同一個樣本里的多種病原，因而在臨床應(yīng)用中受到廣泛關(guān)注。

基于CE進行病原微生物

檢測的實驗流程

個性化定制檢測靶點

基于CE開發(fā)的多重熒光PCR-毛細管電泳片段分析技術(shù)具有靈敏度和特異性高、通量高、重復性好等優(yōu)勢，已被應(yīng)用于公安司法、臨床醫(yī)學、農(nóng)業(yè)育種等研究領(lǐng)域。

圍繞CE平臺，海爾施基因開發(fā)了一系列多重PCR檢測試劑（RUO），包括病原體檢測、疾病易感基因檢測及藥物基因檢測等，其中在感染性病原體這一塊覆蓋了呼吸道、中樞神經(jīng)、腸道及生殖道感染等領(lǐng)域。

表：海爾施基因現(xiàn)有科研產(chǎn)品靶點矩陣

PCR+毛細管電泳

受檢樣本完成核酸提取后，進行反應(yīng)試劑配制，經(jīng)過普通PCR反應(yīng)，最后進行毛細管電泳儀分析。

圖：13種呼吸道病原體多重檢測試劑盒（熒光PCR-毛細管電泳法）檢測流程

CE平臺

海爾施基因旗下多款自主研發(fā)的CE平臺，實驗室用戶可根據(jù)不同的檢測通量及功能需求進行配置。CE平臺基于毛細管電泳技術(shù)，具有Sanger測序和片段分析的功能，用于對樣本中DNA或RNA進行分析，可應(yīng)用于臨床診斷、口岸檢疫、傳染病監(jiān)測、農(nóng)業(yè)育種、藥物研發(fā)等領(lǐng)域，向用戶提供精準的檢測結(jié)果。

Sanger測序儀T2400

浙械注準20242221090

Sanger測序儀T400

浙械注準20202221364

Sanger測序儀兩大功能

產(chǎn)品特點：

☞ Sanger測序儀T2400：

24通道，單次可上機192個樣本，24小時檢測通量超800個樣本，提升實驗室檢測效率。

☞ Sanger測序儀T400：

4通道，卡夾式耗材，即插即用，操作更簡便。

結(jié)果判讀

針對病原體設(shè)計特異性引物，采用多重PCR技術(shù)，在一個反應(yīng)管中同時對多個靶點進行特異性擴增，最終通過毛細電泳分析，根據(jù)擴增片段長度的不同對特定的病原靶點進行區(qū)分。

四川大學華西第二醫(yī)院回顧分析2019—2021年四川地區(qū)，兒童呼吸道非細菌性病原體分布、流行病學特點及臨床特征。本研究共納入2922例患兒，檢出病原體陽性1748例（59.8%），其中1391例（79.6%）為單一病原體檢出，357例（20.4%）為2種及2種以上病原體混合檢出，病原體檢出率排名前三的依次為鼻病毒（39.7%）、合胞病毒（22.8%）及副流感病毒（12.5%），不同病原體在各年齡組兒童中的分布存在差異，肺炎支原體和流感病毒則多見于大于1歲患兒。多重熒光PCR毛細電泳片段分析，滿足了大規(guī)模樣本的多病原檢測，且整個試驗過程耗時短、時效性好（4h之內(nèi)最多可完成192例樣本檢測）。^[2]

“�！毙闹窃� 旗艦多重

睿司倍®3 種呼吸道病原體多重檢測試劑盒

覆蓋包括甲型流感，乙型流感，呼吸道合胞病毒，偏肺病毒，肺炎支原體在內(nèi)的13種常見呼吸道病原體。

助力臨床精準診療、院內(nèi)感控及病原體溯源！

海爾施基因研發(fā)的睿司倍®13種呼吸道病原體多重檢測試劑盒已通過我國藥監(jiān)局NMPA的臨床實驗認證【國家三類試劑注冊證：國械注準20183400518】。該試劑盒采用多重PCR與毛細管電泳片段分析法，符合院內(nèi)檢測標準，單管可同步檢測13種常見呼吸道病原體。

產(chǎn)品特點

廣譜

兼容上下呼吸道標本，覆蓋80%呼吸感染高陽性率和重癥高危型病原體*；

精準

毛細電泳片段分析法，獨特單管多重技術(shù)，三重質(zhì)控與UDG酶防污染體系保證更高特異性與靈敏性。

參考文獻

[1]崔賢艷, 吳勇,等.多重熒光PCR毛細電泳片段分析技術(shù)研究與臨床應(yīng)用[J]. Laboratory Diagnostic Technology Navigation

[2] 王中浩, 楊嵐, 吳思穎等. 2017—2023 年四川省呼吸道病毒感染的流行病學特征分析[J]. 中華預防醫(yī)學，2024, 58(2)

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海爾施基因

寧波海爾施基因科技股份有限公司(HGT)，是一家專注于醫(yī)學檢驗技術(shù)及相關(guān)產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售與服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè)。

業(yè)務(wù)涵蓋臨床檢驗、法庭科學兩大領(lǐng)域，以“讓社會更安全，讓生活更健康”作為企業(yè)使命，致力于為各級醫(yī)療機構(gòu)、第三方檢驗，疾控中心等提供分子診斷、免疫診斷、生化診斷等全面的醫(yī)學檢驗應(yīng)用解決方案，及為公安系統(tǒng)、鑒定機構(gòu)等公共安全行業(yè)提供DNA檢測產(chǎn)品、質(zhì)譜分析產(chǎn)品等完整技術(shù)解決方案。

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