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百日咳是由百日咳鮑特菌感染引起的急性呼吸道傳染病，患者表現(xiàn)為陣發(fā)性痙攣性咳嗽伴雞鳴樣回聲，病程綿延數(shù)月，故稱(chēng)百日咳。由于接種疫苗后產(chǎn)生的免疫力衰減和百日咳鮑特菌變異等因素，全球很多疫苗覆蓋率較高的國(guó)家出現(xiàn)了“百日咳再現(xiàn)”[1]。我國(guó)自上世紀(jì)80年代百日咳疫苗的大規(guī)模接種后，百日咳得到了較好的控制，長(zhǎng)期處于低水平流行，也因此導(dǎo)致相關(guān)研究停滯。筆者團(tuán)隊(duì)自2011年關(guān)注到國(guó)外百日咳再現(xiàn)的現(xiàn)象后，做了一些研究，其中最基本的就是其實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。近期很多同行也向筆者咨詢(xún)，故做了總結(jié)如下：

一、外周血常規(guī)及涂片檢查

白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增高可作為百日咳的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。當(dāng)感染百日咳桿菌時(shí)，外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)會(huì)增高，一般可達(dá)到（20～50）×109/L，其中淋巴細(xì)胞比例占60%～80%[2]，而有意思的是，常見(jiàn)急性時(shí)相蛋白如CRP，SAA等一般卻不增高，或增高有限。研究認(rèn)為，在外周血涂片中由百日咳毒素（PT）誘導(dǎo)產(chǎn)生的裂隙淋巴細(xì)胞對(duì)百日咳的診斷具有很強(qiáng)的提示意義[2]。我們實(shí)驗(yàn)室都會(huì)對(duì)這些典型血常規(guī)結(jié)果進(jìn)行臨床提示。

血常規(guī)報(bào)告提示臨床排除百日咳鮑特菌

二、細(xì)菌培養(yǎng)及抗原檢測(cè)

細(xì)菌培養(yǎng)并分離出百日咳鮑特菌是百日咳診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。然而，在患兒已使用抗生素、接種疫苗、既往感染、病程較長(zhǎng)或樣本保存運(yùn)送條件不當(dāng)?shù)纫蛩赜绊懴�，檢出率僅為0～30%，靈敏度較低。此外，由于實(shí)驗(yàn)操作周期較長(zhǎng)（3～7 d），目前細(xì)菌培養(yǎng)法已很少用于臨床百日咳診斷，但該方法在分離百日咳鮑特菌及藥物敏感性檢測(cè)方面仍有重要意義[3]。國(guó)外也有百日咳抗原檢測(cè)的試劑，但在我國(guó)尚無(wú)相關(guān)產(chǎn)品。

百日咳鮑特菌在炭瓊脂平板的菌落

三、血清學(xué)方法

由于IgM抗體的特異性不佳等因素，如果患者咳嗽了2~3周或更長(zhǎng)時(shí)間，通過(guò)ELISA檢測(cè)抗PT-IgG水平進(jìn)行診斷最有效[5]�？贵w血清學(xué)診斷的標(biāo)本易獲取，操作簡(jiǎn)單快捷，但抗原進(jìn)入后需經(jīng)過(guò)一定的潛伏期才會(huì)產(chǎn)生抗體，因此在診斷早期百日咳時(shí)，抗體檢測(cè)還存在一定時(shí)間限制；另外要注意的是，百日咳疫苗接種也會(huì)導(dǎo)致PT-IgG水平升高，因此在應(yīng)用時(shí)對(duì)于1年內(nèi)接種過(guò)百日咳疫苗的患者需謹(jǐn)慎判斷。

四、核酸檢測(cè)

核酸擴(kuò)增已成為一種成熟的檢測(cè)百日咳病原體的方法。其中，qRT-PCR（實(shí)時(shí)熒光定量PCR）因其耗時(shí)短、靈敏度高、污染風(fēng)險(xiǎn)小已替代傳統(tǒng)PCR成為國(guó)際診斷百日咳的首選方法。目前，我國(guó)已有3家公司具有批準(zhǔn)上市的百日咳鮑特菌核酸檢測(cè)試劑盒。詳情請(qǐng)點(diǎn)擊警惕百日咳來(lái)襲！3家IVD企業(yè)助力精準(zhǔn)診斷查看。

綜上所述，盡管血常規(guī)檢測(cè)對(duì)百日咳診斷是非特異性的，但對(duì)于無(wú)發(fā)熱或低熱伴咳嗽患者，白細(xì)胞計(jì)數(shù)和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)增加、CRP或SAA正�；蚵愿呤堑湫筒±�的典型特點(diǎn)。

而針對(duì)其它幾種特異性檢測(cè)方法，筆者發(fā)表于2013年的研究論文中也進(jìn)行了比較[6]，在使用中要關(guān)注其陽(yáng)性率及病程：在兒童患者中，核酸檢測(cè)方法陽(yáng)性率最高，更適合在發(fā)病3周內(nèi)應(yīng)用，而單份血PT-IgG宜在發(fā)病2-3周后應(yīng)用。

三種百日咳實(shí)驗(yàn)方法與100例陽(yáng)性標(biāo)本數(shù)交集圖[6]

參考文獻(xiàn)：

[1] 國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)，百日咳診療方案（2023版）

[2] 許秀妝, 章金燦. 裂隙淋巴細(xì)胞輔助診斷兒童百日咳的臨床價(jià)值 [J]. 中國(guó)當(dāng)代兒科雜志, 2020, 22(9):996-1000. DOI:10.7499/j. issn.1008-8830.2002205.

[3] van der Zee A , Schellekens JF , Mooi FR . Laboratory diagnosis of pertussis[J]. Clin Microbiol Rev, 2015，28(4)：1005-1026.

[5] 張雨笑, 諶志筠, 何秋水. 國(guó)內(nèi)外百日咳實(shí)驗(yàn)室診斷標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀及血 清學(xué)診斷的應(yīng)用價(jià)值[J]. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志, 2017, 37 (7):560-564.

[5] May ML , Evans J , Riley J ,et al. Development and validation of an Australian in-house anti-pertussis toxin IgG and IgA enzyme immunoassay[J]. Pathology, 2013，45(2)：172-180.

[6]  王增國(guó), 楊楊, 劉瑩, 等. 百日咳實(shí)驗(yàn)室診斷方法的應(yīng)用分析與比較. 中華流行病學(xué)雜志 2013, 34(10): 1010-1012.

作者簡(jiǎn)介

溫金：西安交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、西安市兒童醫(yī)院

王增國(guó)：西安交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、西安市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科主任。承擔(dān)百日咳研究的國(guó)家自然科學(xué)基金2項(xiàng)，陜西省科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)1項(xiàng)。

來(lái)源：全國(guó)體外診斷網(wǎng) CAIVD