腦脊液的理學檢查
一、顏色
正常腦脊液無色透明，但新生兒因血液中膽紅素的移行，故CSF標本的顏色幾乎都是黃色。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生感染、出血、腫瘤等，CSF中出現(xiàn)過多的白細胞或紅細胞和其他色素，使得顏色發(fā)生改變。常見的顏色主要有下列幾種：
1、紅色 CSF中混有血液時，因紅細胞溶解、破壞，可使標本呈現(xiàn)紅色，常見于穿刺損傷出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血和腦出血。穿刺損傷出血僅見于最初幾滴為紅色，以后逐漸變清晰，CSF離心后其上清無色透明，顯微鏡下見紅細胞完整，形態(tài)無改變或皺縮，取其上清液作隱血試驗，由于紅細胞未溶解，沒有游離血紅蛋白產(chǎn)生，故呈陰性結(jié)果。蛛網(wǎng)膜下腔出血或腦出血，其CSF呈均勻紅色，離心后上清液仍顯淡紅色或黃色，顯微鏡下見紅細胞呈鋸齒狀或皺縮，紅細胞并有破壞，上清液作隱血試驗，由于存在游離血紅蛋白，呈陽性結(jié)果。
2、黃色 CSF中含有變性血紅蛋白或多量蛋白質(zhì)，或因顱內(nèi)靜脈血運和腦脊液循環(huán)郁滯，致使CSF呈黃色，頗受臨床醫(yī)生重視。主要見于下列情況：
（1） 陳舊性蛛網(wǎng)膜下腔出血和腦出血，由于紅細胞被破壞，出血5、6小時后即可出現(xiàn)黃色，停止出血后，這種黃色仍可持續(xù)3周左右。
（2）椎管梗阻，如髓外腫瘤，當腦脊液蛋白質(zhì)含量超過1.5g/L時，顏色變黃，其黃色的程度與蛋白質(zhì)含量成正比，梗阻部位越低，變黃更明顯。
（3）化膿性腦膜炎、重癥結(jié)核性腦膜炎和脊髓腫瘤，此時CSF內(nèi)的蛋白質(zhì)含量可明顯升高。
（4）重癥黃疸，如核黃疸、甲型肝炎、肝硬化、鉤端螺旋體病、膽道梗阻、新生兒溶血病等，一般CSF內(nèi)膽紅素濃度超過8.5μmol/L時，即可被黃染。
（5）CSF中含有黃素、類胡蘿卜素、脂色素和黑色素等。亦可使CSF呈現(xiàn)黃色。
3、米湯樣乳白色 由于白細胞或膿細胞增多所致。常見于各種化膿性細菌引起的化膿性腦膜炎。
4、綠色 見于綠膿桿菌、肺炎鏈球菌、甲型鏈球菌所引起的腦膜炎。
5、褐色或黑色 見于中樞神經(jīng)系統(tǒng)（尤其是腦膜）黑色素肉瘤或黑色素瘤等。
二、混濁度（透明度）
正常腦脊液清晰透明。CSF中如果白細胞總數(shù)超過300×106個/L時，則變得混濁。蛋白質(zhì)含量增高或含有大量細菌、霉菌等，也可使其變得混濁，如結(jié)核性腦膜炎時CSF呈毛玻璃狀，化膿性腦膜炎時呈膿樣等。
檢驗結(jié)果報告時，一般用“清亮”、“微混”和“混濁”等來描述。
三、凝塊或薄膜
凡是可能有纖維蛋白析出的CSF標本，如臨床上疑為結(jié)核性腦膜炎時，應保留標本，最好靜置24小時，觀察有無凝塊和薄膜形成。
正常腦脊液放置24小時不形成薄膜，無凝塊和沉淀。當CSF內(nèi)蛋白質(zhì)（包括纖維蛋白原）增加至10g/L時，可出現(xiàn)薄膜或凝塊�；撔阅X膜炎往往在1~2小時內(nèi)形成薄膜、凝塊或沉淀。結(jié)核性腦膜炎在12~24小時形成膜狀物。神經(jīng)梅毒可以出現(xiàn)小絮狀凝塊而不形成薄膜。蛛網(wǎng)膜下腔阻塞時，其遠端部位的CSF因蛋白質(zhì)含量高常呈現(xiàn)黃色膠凍狀。
檢驗結(jié)果報告時，一般按“無凝塊”、“有凝塊”、“有薄膜”等報告。
四、比密（比重）
CSF比密的測定方法與尿比密的測定基本相同，常用的方法是折射儀法。正常成人CSF的比密為1.006~1.008。
五、pH
pH的測定用微量pH計測量，正常成人CSF的pH為7.35~7.40。
腦脊液的顯微鏡檢查
一、 細胞總數(shù)
1、直接計數(shù)法
如腦脊液標本比較清亮或微混，可用此方法。
用滴管吸取已混勻的腦脊液標本少許，直接滴入細胞計數(shù)板，充入計數(shù)池內(nèi)，靜置2~3分鐘，低倍鏡下計數(shù)兩個池內(nèi)的四角和中央大格共10個大格內(nèi)的細胞數(shù)，即為1μl腦脊液中的細胞總數(shù)（紅、白細胞總數(shù)）。在書寫報告時，再換算成每升腦脊液中的細胞總數(shù)。
2、稀釋計數(shù)法 如果腦脊液的細胞過多、混濁或帶血的腦脊液可用血紅蛋白毛細吸管吸取混勻的腦脊液20μl，加入有紅細胞稀釋液0.38μl的小試管中，混勻后滴入計數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡計數(shù)4個大方格的細胞總數(shù)，乘以50，即為每微升腦脊液的細胞總數(shù)，最后換算成每升腦脊液的細胞總數(shù)報告。
二、白細胞計數(shù)
1、直接計數(shù)
非血性標本，用吸管吸取冰乙酸后全部吹出，使管壁僅附著少許冰乙酸，然后用同一吸管吸取少量混勻的腦脊液標本，數(shù)分鐘后紅細胞就會完全溶解，再滴入計數(shù)池內(nèi)，按上法計數(shù)。
2、稀釋計數(shù) 如白細胞過多，可用白細胞稀釋液稀釋后，按上法計數(shù)，注意計數(shù)結(jié)果應乘以稀釋倍數(shù)。
3、血性標本的校正計數(shù) 混有血液的腦脊液標本混勻后，用1%的冰乙酸溶液稀釋后仍按上法計數(shù)。為了剔除因出血而帶來的白細胞，可用下式進行校正。
三、白細胞分類計數(shù)
1、直接分類法 在白細胞直接計數(shù)后，轉(zhuǎn)高倍鏡觀察，依據(jù)細胞形狀和細胞核的形態(tài)進行分類，共計數(shù)白細胞和內(nèi)皮細胞100個，分別計算單個核細胞和中性粒細胞所占的比例，以百分數(shù)表示。如白細胞總數(shù)不足100個，則直接寫出單個核細胞和中性粒細胞的具體數(shù)字。如白細胞總數(shù)在30以下，可不做直接分類計數(shù)或改用染色分類計數(shù)。
2、染色分類法 腦脊液標本離心，取沉淀涂片，制成均勻薄膜，置室溫或37℃孵箱中，干燥后以瑞氏染色，油鏡下進行分類計數(shù)。以百分比表示之。如有內(nèi)皮細胞，則另行描述報告。
四、注意事項
（1）腦脊液細胞計數(shù)應及時進行，一般應在1小時內(nèi)進行。如放置過久，細胞會破壞或沉淀與纖維蛋白凝集成塊，導致計數(shù)不準確。標本須混勻后方可進行計數(shù)，否則影響結(jié)果。
（2）穿刺損傷血管，導致血性腦脊液，此時細胞總數(shù)已無意義，白細胞計數(shù)也須校正后才有意義。
（3）細胞計數(shù)時，如發(fā)現(xiàn)較多的紅細胞有皺縮或腫脹現(xiàn)象，應予以描述，以協(xié)助臨床醫(yī)生鑒別陳舊或新鮮出血。
（4）細胞計數(shù)時，須注意把紅細胞或淋巴細胞與新型隱球菌相區(qū)別：A、新型隱球菌具有“出芽”現(xiàn)象，不溶于乙酸，滴加0.35mol/L的乙酸后，顯微鏡下仍保持原形，而紅細胞則被乙酸溶解消失，淋巴細胞則胞核和胞漿更為明顯。B、滴加印度墨汁一滴，加蓋玻片，高倍鏡下見新型隱球菌有夾膜，不著色，而紅細胞或淋巴細胞無此現(xiàn)象。
（5）細胞計數(shù)板用完后，應用75%的酒精消毒60分鐘。忌用苯酚消毒，因有損計數(shù)池的刻度。
五、正常參考值
正常人腦脊液中無紅細胞，僅有少量白細胞。
成人：（0~8）×106/L兒童：（0~15）×106/L腦脊液中細胞多為淋巴細胞及大單核細胞，兩者之比約為7：3，偶見內(nèi)皮細胞。
六、臨床意義
1、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變的腦脊液，細胞數(shù)可增多，其增多的程度及細胞的種類與病變的性質(zhì)有關。
2、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病毒感染、結(jié)核性或霉菌性腦膜炎時，細胞數(shù)可中度增多，常以淋巴細胞為主。
3、細菌感染時如化膿性腦膜炎，細胞數(shù)顯著增加，以中性粒細胞為主。
4、腦寄生蟲病時，可見較多的嗜酸性粒細胞。
5、腦室或蛛網(wǎng)膜下腔出血時，腦脊液內(nèi)可見多數(shù)紅細胞。
6、細胞數(shù)增減程度和細胞種類與某些疾病的程度有關，如化膿性腦膜炎經(jīng)過有效的抗生素治療后，細胞總數(shù)迅速下降；結(jié)核性腦膜炎患者在早期以中性分葉核細胞為主，以后則淋巴細胞較多；腦血管意外病人腦脊液中的紅細胞數(shù)目減少，結(jié)合臨床，預示著出血既將停止或已經(jīng)停止。
七、病原體形態(tài)學檢查
1、細菌
臨床懷疑流行性腦脊髓膜炎或化膿性腦脊髓膜炎時，應做細菌學涂片檢查。操作如下：
（1）腦脊液標本2~3ml，以3000rpm離心15分鐘，去上清液，將沉淀物涂在潔凈玻璃片上，共制片2張，涂片自然或在37℃溫箱中干燥固定，且勿用火焰固定。
（2）涂片固定后，一張用亞甲藍染色，另一張用革蘭氏染色。
（3）革蘭氏染色涂片用于檢查肺炎雙球菌、流感桿菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、鏈球菌、大腸桿菌等，亞甲藍染色用于檢查腦膜炎雙球菌。如找到細菌，則按其染色性質(zhì)及形態(tài)報告。
（4）如懷疑結(jié)核性腦膜炎，可將腦脊液標本靜置24小時，取其液面薄膜涂片，置37℃溫箱中干燥固定，作抗酸染色，油鏡下找抗酸桿菌。
（5）采集標本時應注意污染。顯微鏡觀察時應注意細胞內(nèi)外的細菌形態(tài)，報告時應予以描述。
2、真菌檢查—新型隱球菌的檢查（1）取腦脊液標本，以2000rpm離心10分鐘，沉淀物涂片，加經(jīng)過過濾的優(yōu)質(zhì)細墨汁一滴，混合后加蓋玻片顯微鏡下檢查。
（2）先用低倍鏡觀察，如發(fā)現(xiàn)在黑色背景下有圓形透光小點，中間有一細胞大小的圓形物質(zhì)，即轉(zhuǎn)用高倍鏡仔細觀察其結(jié)構(gòu)，新型隱球菌直徑5~20μm，可見明顯的厚夾膜，周圍有較強的折光，并有出芽的球形孢子。
（3）發(fā)現(xiàn)上述特征，即可報告墨汁涂片找到“隱球菌屬”。并須進一步作真菌培養(yǎng)。
3、寄生蟲檢查 將腦脊液標本離心，其沉淀物全部倒在玻片上涂片，低倍鏡下檢查可發(fā)現(xiàn)血吸蟲卵、肺吸蟲卵、弓形體、阿米巴等。
4、病原體檢查的臨床意義 正常人腦脊液中無病原體。腦脊液標本中如找到病原體，為臨床提供了病因診斷的依據(jù)，有確定診斷的價值。如發(fā)現(xiàn)細菌，結(jié)合臨床表現(xiàn)，可以確診為該種細菌所致的腦膜炎；發(fā)現(xiàn)新型隱球菌，則可診斷為新型隱球菌性腦膜炎；發(fā)現(xiàn)血吸蟲卵或肺吸蟲卵，可診斷為腦性血吸蟲病或腦性肺吸蟲病。
八、細胞學檢查
為進一步診斷，除用一般涂片進行瑞氏染色分類外，近年來還采用玻片離心法、醋纖膜濃集法、細胞沉淀法等，使腦脊液中的細胞濃集、染色，再進行細胞學檢查，以提高診斷水平。
簡便的腦脊液細胞收集法是細胞沉淀室法，把腦脊液標本倒在沉淀管內(nèi)，讓細胞直接沉降在玻片上，30~60分鐘后，水份即由沉淀管周圍的濾紙吸干，取下玻片干燥，先用瑞氏染液預染2分鐘，加pH6.0的緩沖液稀釋，1分鐘后沖洗，再用姬姆薩染液復染8~10分鐘，水沖洗，干燥后用油鏡檢查，并進行細胞分類計數(shù)。
如將微型細胞沉淀室同玻片一起離心（1000rpm）則為玻片離心法。細胞沉淀法和玻片離心法克服了腦脊液中細胞數(shù)目少和易破壞的特點，便于正確地進行分類計數(shù)，發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞、白血病細胞等異常細胞，以及發(fā)現(xiàn)細菌和霉菌等。
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