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• 你需要制備蛋白樣本嗎？

• 你需要分離純化核酸嗎？

• 你的工作跟診斷相關嗎？

01 羧基磁珠是什么？

羧基磁珠是生物磁珠的一種，磁珠一般具有超順磁性、磁響應速度快、比表面積大、單分散性、膠體穩(wěn)定性等特點。羧基磁珠表面修飾有豐富的羧基基團，能夠在特殊化學試劑的作用下將蛋白質、核酸、多肽等偶聯到磁珠表面，在蛋白純化、免疫檢測、分子檢測、NGS、細胞分離等領域應用廣泛。

02 不同應用方向及使用方法

化學發(fā)光免疫分析

在化學發(fā)光免疫分析中磁珠作為反應載體，其上包被特異性抗原或抗體，捕獲待測物中的靶標分子。蛋白質可以通過吸附作用與羧基修飾顆粒結合，吸附是由蛋白質和顆粒表面之間的疏水和離子相互作用介導的，吸附作用發(fā)生非常迅速。除了被吸附外，蛋白質還可以共價連接到羧基修飾的顆粒表面。如下圖，顆粒上的羧基被水溶性碳二亞胺激活，與被吸附蛋白質的自由氨基反應形成酰胺鍵。

羧基磁珠與蛋白共價偶聯方法：

a:洗滌：取5-10 mg磁珠，用偶聯緩沖液洗滌2次，去除上清。

b:活化：用pH5.0 MES緩沖液重懸，加入EDC及NHS水溶液（建議摩爾比EDC：COOH>2，NHS：COOH>20），在混勻器上室溫混勻30 min。

c:包被：用MES緩沖液重復洗滌2次，加入20-100 ug抗體，室溫混合2 h。

d:封閉：去上清，加入乙醇胺或甘氨酸等封閉劑，封閉30 min。

e:保存：用儲存緩沖液洗滌3-5次，加入儲存液搖勻后置于2-8 ℃保存。

核酸提取與片段篩選

羧基磁珠提取核酸體系一般包括聚乙二醇 (PEG) 及鹽離子等，其中PEG是影響核酸回收的最重要因素。原理是核酸在較高濃度的PEG及NaCl存在時，核酸脫去水化層構象由線狀轉變?yōu)榫砬�球狀，暴露出大量帶負電荷的磷酸基團，帶負電的磷酸基團借Na+與羧基形成離子橋，核酸分子被特異吸附到羧基磁珠表面。當反應緩沖液被去除之后，加入水性分子，會快速充分水化核酸，解除三者間的離子作用，使吸附到磁珠上的核酸被純化出來。

核酸片段越長，表面裸露的負電荷磷酸基團越多，磁珠優(yōu)先吸附大片段，因而可通過添加一定比例的磁珠吸附特定大小以上的片段，去除上清，再將磁珠上的核酸洗脫下來，做到核酸純化。在NGS中常常需要從片段化DNA中選擇特定大小的DNA片段，會使用磁珠進行兩輪吸附達到片篩。第—輪磁珠吸附目的片段以上的大片段，此時棄磁珠留上清（目的片段在上清中）。第二輪磁珠吸附目的片段，此時棄上清，再將磁珠上的目的片段洗脫回收。

蛋白研究

基于質譜技術的蛋白質組學分析一直是蛋白研究的有力手段，決定靈敏度的關鍵步驟是蛋白質材料的提取。以簡化蛋白質組學樣品處理為目標，SP3技術被開發(fā)出來，在效率、可擴展性、速度、吞吐量和靈活性方面優(yōu)于現有處理方法，促進超靈敏分析。SP3（單罐固相增強樣品制備）是一種基于磁珠的方法，用于快速、穩(wěn)健和有效地處理蛋白質組學分析的蛋白質樣品，包括大量和非常少量的簡單和復雜的蛋白質混合物，跨越許多生物體。

SP3利用類似于親水性相互作用液相色譜的機制，在下游蛋白質組學分析之前，交換或去除通常用于促進細胞或組織裂解、蛋白質增溶和酶消化的成分（例如，洗滌劑、離液鹽、變性劑、緩沖液和酸）。SP3方案包括非選擇性蛋白質結合和沖洗步驟，這些步驟通過使用乙腈/乙醇驅動的溶劑化捕獲羧基磁珠表面，并在水條件下洗脫純化的物質。與其他方法相比，SP3具有與大量溶液添加劑的兼容性，以及幾乎無損和無偏的蛋白質回收能力。

03 Sera-Mag系列羧基磁珠

Cytiva擁有Sera-Mag和Sera-Mag SpeedBead兩大系列產品，都是直徑為1 µm的超順磁性磁珠，粒徑均一，緩慢的沉降速率；同時具有花椰菜狀結構，大大增加了磁珠的表面積，雙層磁的結構磁響應速度更快；在多種環(huán)境中都具有極高的穩(wěn)定性，在pH 1-13環(huán)境中、在硫氰酸胍、DMF、DMSO、超聲中保持穩(wěn)定，在SP3技術中表現出色。