
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR)因其快速、方便等優(yōu)勢,目前占據(jù)了臨床分子診斷市場的90%。這種創(chuàng)新且簡便的技術(shù),是分子診斷領(lǐng)域的強大工具,也是如今許多主流癌癥診斷的基礎(chǔ)。隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷發(fā)展,腫瘤檢測、靶向治療隨之越來越成熟。研究發(fā)現(xiàn),許多癌癥/遺傳病與基因突變、病毒感染等具有顯著關(guān)聯(lián),同時,靶向治療的前提是對藥物的分子靶點進(jìn)行基因檢測,找到導(dǎo)致腫瘤或遺傳病發(fā)生的基因突變。
ARMS-PCR即擴增阻滯突變系統(tǒng)PCR(Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR),又稱為等位基因特異性PCR(Allele-Specific PCR,AS-PCR),是一項在PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來的新方法,可檢測出DNA中各種點突變,是目前國際上腫瘤個體化分子檢測最重要、應(yīng)用最廣泛的技術(shù)之一,其在臨床應(yīng)用中的優(yōu)勢已被業(yè)內(nèi)專家廣泛認(rèn)可。
ARMS PCR的工作原理
ARMS PCR引物設(shè)計時等位基因兩條上游引物中3’端核苷酸不同,兩條引物分別對野生型和突變型進(jìn)行特異性擴增時,與模板不能完全匹配的上游引物將不能與模板完全形成互補堿基對,形成錯配,一方面,堿基錯配會影響產(chǎn)物延伸,另一方面,錯配堿基會改變等位基因變體的退火溫度,最終導(dǎo)致不同基因型擴增效果的差異,對差異進(jìn)行檢測即可確認(rèn)基因型。
ARMS-PCR產(chǎn)物的檢測
1
瓊脂糖凝膠電泳:取一定量PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,通過條帶的位置來確定基因型。
2
熔解曲線分析:ARMS-PCR體系中加入染料/探針,對PCR產(chǎn)物進(jìn)行熔解曲線分析,根據(jù)熔解曲線的位置來確定基因型。
3
實時熒光檢測:采用TaqMan探針,通過分析熒光數(shù)據(jù)確認(rèn)其基因型。目前市場主流即為該檢測方式(ARMS-qPCR)。
ARMS-PCR是遺傳病診斷最準(zhǔn)確的技術(shù)工具之一,在癌癥/遺傳病篩查和靶向治療領(lǐng)域也有著重要貢獻(xiàn)。其主要優(yōu)勢是操作便捷、快速、靈敏度高,對器材成本要求較低,有大量成熟的商品化試劑盒可供使用等。
ARMS-PCR的高特異性要求
從ARMS-PCR的原理上來看,該檢測方法對PCR體系的特異性要求較高。保證特異性可以從以下兩方面著手:
1
優(yōu)化引物設(shè)計:常見手段之一是引入超過一個錯配堿基,通常在3’端的倒數(shù)第二或第三位,與末端錯配堿基共同作用,使不互補的擴增產(chǎn)物顯著降低;同時減少PCR擴增的循環(huán)數(shù),因為循環(huán)數(shù)增加會增加假陽性結(jié)果的幾率。
2
調(diào)整反應(yīng)體系中相關(guān)組分以提高反應(yīng)體系的特異性。
近岸蛋白全新推出針對ARMS方法調(diào)配的qPCR預(yù)混液(目錄號:E406),具有超高的阻滯擴增性能。已進(jìn)行多樣本、多靶標(biāo)驗證,客戶反饋性能優(yōu)異,更有多重ARMS-qPCR預(yù)混液提供測試。
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產(chǎn)品特點
高特異性:超高的阻滯擴增性能
通用性好:經(jīng)多樣本、多靶標(biāo)驗證
高穩(wěn)定性:全預(yù)混體系37℃加速7天,產(chǎn)品性能不變
數(shù)據(jù)展示
高特異性
超高的阻滯擴增性能,顯著區(qū)分突變型與野生型(客戶樣本)。
通用性好
經(jīng)多樣本、多靶標(biāo)驗證
擴增性能驗證
標(biāo)準(zhǔn)曲線R2達(dá)到0.999,擴增效率達(dá)100%左右。
高穩(wěn)定性
全預(yù)混體系穩(wěn)定性驗證:在擴增體系中加入引物、探針,37℃存放0、1、3、5、7天,產(chǎn)品性能不變。
質(zhì)粒模板濃度梯度:10pg/μl、1pg/μl、100fg/μl、10fg/μl、1fg/μl、0.1fg/μl。
客戶項目及反饋
1
腫瘤相關(guān)基因突變的SNP分型,性能優(yōu)于客戶測試的其他品牌產(chǎn)品;
2
白血病融合基因檢測,微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)平臺,性能優(yōu)于客戶測試的其他品牌產(chǎn)品。
推薦產(chǎn)品:
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品描述 |
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E406-01A |
NovoStart® High-Specificity Probe qPCR SuperMix (UDG) |
5ml
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針對ARMS法調(diào)整的探針法qPCR預(yù)混液,具有高特異性、高通用性的特點。產(chǎn)品獲得多客戶驗證反饋,性能優(yōu)異 |
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E406-01B |
NovoStart® High-Specificity Probe qPCR SuperMix (UDG) |
25ml
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相關(guān)產(chǎn)品:
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品描述 |
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E416-01A |
NovoStart® High-Specificity Probe qPCR Kit (UDG) |
500次 |
E406配方的酶和buffer分開形式 |
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E416-01B |
NovoStart® High-Specificity Probe qPCR Kit (UDG) |
2500次 |
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測試裝 |
NovoStart® Mμltiplex Probe ARMS-qPCR SuperMix (UDG) |
1ml
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針對ARMS法調(diào)整的探針法多重擴增qPCR預(yù)混液,具有高特異性、高通用性的特點。產(chǎn)品獲得多客戶驗證反饋,性能優(yōu)異 |
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E097-01A |
HotStart Taq DNA Polymerase (B) (with dNTP) |
250U |
抗體修飾熱啟動酶,高特異性,啟動快速 |
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E097-01B |
HotStart Taq DNA Polymerase (B) (with dNTP) |
250U×5 |
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E097-02A |
HotStart Taq DNA Polymerase (B) |
250U |
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E097-02B |
HotStart Taq DNA Polymerase (B) |
250U×5 |
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