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重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp® 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物安全、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

RPA技術(shù)被廣泛用于結(jié)核桿菌、耐藥菌MRSA、沙門氏菌等常見致病菌的檢測。在臨床診斷和食品安全方面，為人們提供了簡單快速的實(shí)地篩查方案。

艱難梭狀芽孢桿菌（C. difficile）是一種會(huì)引起感染性腹瀉的重要致病菌。日前，研究人員以這種致病菌的毒力基因tcdB為靶標(biāo)，開發(fā)了一個(gè)低成本的微流體RPA平臺(tái)，這個(gè)檢測C. difficile的RPA分析芯片只需要6.4 µL的初始樣本，能夠?qū)�擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控。

據(jù)估計(jì)，世界上約三分之一的人體內(nèi)潛伏著結(jié)核�。═B）的致病菌，這些致病菌大多在肺部處于休眠狀態(tài)。改善檢測方法幫助TB診斷，被WHO列為公共建康的首要問題之一。RPA作為一種常溫的快速DNA 擴(kuò)增法，為資源匱乏的地區(qū)提供了檢測TB的簡便工具。研究人員在RPA的基礎(chǔ)上，快速檢測了結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群MTC的DNA（IS6110 和IS1081）。在39°C的環(huán)境下，RPA檢測能在20分鐘內(nèi)得出高靈敏度的結(jié)果。進(jìn)一步研究表明，在檢測TB感染者的肺部樣本時(shí)，RPA檢測比熒光顯微鏡檢測還要準(zhǔn)確。

抗生素濫用現(xiàn)象使耐藥菌日漸增多，目前這已經(jīng)成為了一個(gè)全球性的公共健康問題。作為一種重要且危險(xiǎn)的致病菌，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌MRSA一直是臨床治療中的棘手問題。在對(duì)MRSA進(jìn)行DNA檢測的時(shí)候，引物只能靶標(biāo)一個(gè)多變的染色體區(qū)域，SCCmec。今年七月的《Plos one》雜志上發(fā)表的一項(xiàng)研究，通過多重RPA反應(yīng)篩查了726個(gè)MRSA分離物。研究人員通過二代測序發(fā)現(xiàn)，24個(gè)RPA未檢出的分離物中出現(xiàn)了新的插入突變，需要重新設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物。這一結(jié)果說明，臨床上的MRSA篩查不能完全依賴DNA檢測。

此外又一項(xiàng)研究展示了能夠同時(shí)擴(kuò)增和檢測三種病原體的RPA芯片，包括淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae）、沙門氏菌（Salmonella enterica）和MRSA。這種芯片可以在二十分鐘以內(nèi)完成三種病原體和對(duì)照質(zhì)粒的檢測，S. enterica和MRSA的檢出限可達(dá)10 CFU，N. gonorrhoeae的檢出限可達(dá)100 CFU。這項(xiàng)研究中的RPA芯片，有望成為實(shí)地篩查重要致病菌的簡便工具。

RPA在食品安全領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用。研究人員在RPA的基礎(chǔ)上首次建立了等溫實(shí)時(shí)的STEC檢測體系，設(shè)計(jì)并評(píng)估了一系列引物和熒光探針，實(shí)現(xiàn)了很高的特異性和靈敏度，可以用來篩查食品中的安全隱患，比如過敏原（榛子、花生、大豆、蕃茄和玉米）、轉(zhuǎn)基因成分（P35S和TNOS）、致病菌（Salmonella sp.和Cronobacter sp.）以及真菌（Fusarium sp.）。