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　　11月25日，以“精準為盟，伴隨于行”為主題的默克第2屆結直腸癌精準聯(lián)盟峰會在上海召開，睿昂基因（688217）作為默克精準聯(lián)盟成員之一，公司董事長熊慧與其他同道一起開啟了“規(guī)范化結直腸癌精準檢測之路”的儀式。

　　睿昂基因創(chuàng)始人熊慧博士出席此次儀式

　　據(jù)悉，結直腸癌一直以來高居我國癌癥發(fā)病率和死亡率的前五，對國民健康造成了嚴重威脅。結直腸癌是來源于結直腸黏膜上皮的癌性病變，致死性強，嚴重威脅人類健康。其早期癥狀不明顯，隱匿性強，故基因標志物檢測被認為是結直腸癌最有效的預警方式。

　　睿昂基因研發(fā)負責人柯中和表示，分子標志物檢測能夠助力結直腸癌精細化管理，目前指南里針對結直腸癌，強烈推薦的分子標志物主要是以下三個：RAS突變，BRAF突變，微衛(wèi)星不穩(wěn)定MSI和DNA錯配修復MMR缺陷。其中，RAS、BRAF參與EFGR信號轉(zhuǎn)導通路，兩者發(fā)生突變均會導致EGFR單抗治療失效；而微衛(wèi)星不穩(wěn)定MSI和DNA錯配修復MMR缺陷，則會導致腫瘤細胞抗原性增強，從而對免疫檢查點抑制劑（ICIs）治療產(chǎn)生更好的效果。因此，這些分子標志物的檢測對于結直腸癌精準治療方案制訂至關重要。

　　柯中和指出，目前臨床上針對結直腸癌初診患者，可通過IHC、FISH、一代測序等檢測技術進行標志物檢測。但對于組織樣本難以獲取或突變占比不高的患者，則亟需一種更好的檢測技術，而ddPCR檢測可彌補這一不足，尤其是基于游離DNA樣本的檢測，更是可提前監(jiān)測患者耐藥及復發(fā)出現(xiàn)，為后續(xù)臨床治療方案提供指導，幫助患者受益。對于這些滿足臨床需求的檢測技術的如何盡快落地，就需要和臨床和藥企一起推動，以伴隨診斷試劑盒的形式參與藥企的靶向藥物臨床試驗，走創(chuàng)新通道使藥物和伴隨診斷能盡快雙雙落地實現(xiàn)轉(zhuǎn)化，最終使患者盡早受益。

　　美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡（NCCN）和中國臨床腫瘤學會（CSCO）指南指出，MSI/MMR、RAS和BRAF是結直腸癌常檢測的三個基因，并推薦結直腸癌確診時需做MSI/MRR基因突變的檢查，若是轉(zhuǎn)移性或復發(fā)性腸癌則需做RAS、BRAF基因突變的檢測。KRAS基因作為公認的癌基因，其突變與酪氨酸激酶抑制劑等靶向藥物的原發(fā)耐藥有關。臨床上，西妥昔單抗注射液等靶向藥物對KRAS野生型患者顯示出較好的治療效果，而對KRAS基因突變型患者無效。同時，NRAS基因突變可能降低西妥昔單抗注射液的藥物效果。并且研究表明BRAF基因突變同樣與結直腸癌的靶向藥物耐藥有關，通常認為BRAF基因突變的患者對靶向藥物效果不佳，且BRAF突變與患者預后密切相關。另外，NCCN指南指出循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）動態(tài)監(jiān)測有助于提前預警結直腸癌術后復發(fā)和轉(zhuǎn)移。

　　據(jù)介紹，睿昂基因以微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）檢測平臺為主導，開發(fā)研制的KRAS、NRAS和BRAF基因突變檢測試劑盒（ddPCR法）能夠精確檢測組織和外周血游離DNA樣本中突變頻率0.1%的基因突變情況。該試劑盒由KRAS G12/13反應液、KRAS Q61反應液、NRAS G12/13反應液、NRAS Q61反應液、BRAF V600反應液（具體位點如表1所示）以及ddPCR MIX3組成。KRAS G12/13反應液、KRAS Q61反應液、NRAS G12/13反應液、NRAS Q61反應液和BRAF V600反應液含有相應檢測靶標片段的引物和探針；ddPCR MIX3含擴增所需的熱啟動酶、dNTPs、MgCl2、buffer和微滴穩(wěn)定劑，用于微滴制備后形成熱穩(wěn)定的油包水微滴，并確保靶標片段在微滴中進行PCR擴增。搭配一體化的數(shù)字PCR系統(tǒng)（將微滴制備、PCR擴增、微滴讀取與分析集成），待芯片上機后可自動將待測的樣本DNA、引物、探針以及ddPCR MIX3（熱啟動酶、dNTPs、MgCl2、buffer和微滴穩(wěn)定劑）的混合液分隔在均勻的納升級微滴內(nèi)，在每個微滴中PCR反應都獨立進行。擴增完畢，系統(tǒng)自動運行至分析模塊進行熒光讀取，通過顯微光學系統(tǒng)拍攝雙色熒光圖像，或使微滴依次通過雙色光學檢測系統(tǒng)。運用泊松分布原理計算陽性和陰性微滴的數(shù)量及陽性微滴的比例，最終分析軟件可計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數(shù)。