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引言

近日，國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局公布第二十三屆中國(guó)專(zhuān)利獎(jiǎng)獲獎(jiǎng)名單，圣湘生物以“檢測(cè)SARS-CoV-2的組合物、試劑盒、方法及其用途”專(zhuān)利榮獲銀獎(jiǎng)。該專(zhuān)利技術(shù)由圣湘生物自主研發(fā)，攻克多重RT-PCR方法檢測(cè)靈敏度低的難題，在一個(gè)PCR反應(yīng)管內(nèi)同時(shí)檢測(cè)3個(gè)靶基因區(qū)域，并實(shí)現(xiàn)了檢測(cè)的高靈敏性與高特異性，在新冠疫情防控中廣泛應(yīng)用，為160余個(gè)國(guó)家和地區(qū)貢獻(xiàn)了“圣湘力量”。

在疫情爆發(fā)早期，有些新冠試劑由于引物探針設(shè)計(jì)不合理，體系優(yōu)化不到位，初次核酸檢測(cè)陽(yáng)性檢出率只有30-50%，試劑假陰性假陽(yáng)性結(jié)果層出不窮，這給臨床診斷和疫情控制帶來(lái)極大阻礙。
圣湘生物新冠核酸檢測(cè)試劑盒采用多重RT-PCR技術(shù)，這一技術(shù)的準(zhǔn)確性取決于多種因素，包括：
1）引物和探針的設(shè)計(jì)和篩選，這取決于靶基因區(qū)域的特異性選擇，引物、探針的序列、結(jié)構(gòu)以及退火溫度的選擇，防止多條引物探針之間的干擾或交叉反應(yīng)；2）RT-PCR反應(yīng)體系的設(shè)計(jì)和優(yōu)化，不同的引物探針需要調(diào)配不同的酶催化體系反應(yīng)緩沖液環(huán)境，需要反復(fù)優(yōu)化；3）反應(yīng)體系的抗干擾能力，其中可能含有來(lái)自樣品的抑制劑和其他干擾物質(zhì)，需要對(duì)核酸提取、引物探針、反應(yīng)體系等進(jìn)行反復(fù)測(cè)試和優(yōu)化，確定所用引物探針、試劑的最佳濃度；4）不同儀器的適用性，多重反應(yīng)時(shí)，各基因的擴(kuò)增效率不一致，可能導(dǎo)致在不同儀器上的結(jié)果不一樣，需要進(jìn)行多次組分調(diào)整及驗(yàn)證。
在擴(kuò)增方法、基因區(qū)域（尤其對(duì)應(yīng)低表達(dá)量的區(qū)域進(jìn)行多個(gè)靶點(diǎn)的選擇）、引物探針設(shè)計(jì)方式上進(jìn)行了反復(fù)設(shè)計(jì)篩選、大量實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和測(cè)試驗(yàn)證，優(yōu)選出最佳的解決方案，為低載量感染的新型冠狀病毒感染的檢測(cè)提供了非常好的檢測(cè)方法。

該專(zhuān)利還確定了病毒表達(dá)量相對(duì)較低的ORF1ab基因的兩個(gè)特定區(qū)域和N基因特定區(qū)域進(jìn)行組合檢測(cè)，結(jié)合人表皮管家基因作為內(nèi)參照（內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)），獲得了高靈敏和高準(zhǔn)確性優(yōu)勢(shì)。 

圖1 參評(píng)專(zhuān)利技術(shù)優(yōu)勢(shì)

該專(zhuān)利技術(shù)在檢測(cè)2019-nCoV的靈敏度、特異性、穩(wěn)定性以及抗干擾性能等方面均具有較為明顯的優(yōu)勢(shì)，更利于產(chǎn)業(yè)化轉(zhuǎn)化應(yīng)用，專(zhuān)利技術(shù)整體處于行業(yè)先進(jìn)水平。

不僅如此，圣湘的核酸檢測(cè)試劑在面對(duì)傳播速度快、傳染性強(qiáng)、感染者病毒載量高的多種新冠變異株的表現(xiàn)也毫不遜色，在國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心第一時(shí)間分別組織開(kāi)展2021年全國(guó)新型冠狀病毒“德?tīng)査�”、“拉姆達(dá)”變異株核酸檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，圣湘生物新冠核酸檢測(cè)試劑對(duì)16份變異株樣本檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，以滿分成績(jī)?cè)诙鄠�(gè)實(shí)驗(yàn)室通過(guò)了變異株檢測(cè)能力評(píng)價(jià)（見(jiàn)圖2），進(jìn)一步說(shuō)明基于參評(píng)專(zhuān)利所研制的新冠核酸檢測(cè)試劑盒能夠精準(zhǔn)狙擊新冠病毒“德?tīng)査�”、“拉姆達(dá)”變異株，確保不脫靶、不漏檢。 注：國(guó)家臨檢中心第三方質(zhì)量評(píng)價(jià)中顯示本申請(qǐng)專(zhuān)利的產(chǎn)品對(duì)所有質(zhì)控品均能很好檢出，性能符合要求

圖2 國(guó)家衛(wèi)生健康委核酸檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)

截止目前，參評(píng)專(zhuān)利轉(zhuǎn)化產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)和國(guó)際新型冠狀病毒檢測(cè)已應(yīng)用超5億人份，這種多靶點(diǎn)多區(qū)域的設(shè)計(jì)模式極其有利于檢出容易突變或進(jìn)化快的RNA病毒/DNA病毒，在高靈敏度檢測(cè)上應(yīng)用前景廣闊，尤其針對(duì)新發(fā)及發(fā)熱呼吸道癥候群相關(guān)病原體的快速診斷，以提升對(duì)突發(fā)疫情的快速準(zhǔn)確檢測(cè)能力，助力疫情防控的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早隔離。